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5.3
皮膚的凍干
凍干皮膚在醫(yī)學上的臨床應用研究始于20世紀50年代。動物皮膚的凍干目的是用于對藥物經皮膚滲透性的研究。由于透皮吸收給藥新型的問世，藥物經皮滲透性的研究正成為開發(fā)這類新型篩選藥物的重要手段，由于大量長時間動物皮的需求，實際應用時常將待用皮放在冰箱里，可保存1周左右。時間再長，不但影響藥理實驗的穩(wěn)定性，而且皮膚將變質。為增長皮膚保存期，可將動物皮膚凍干保存；人類皮膚凍干的目的是用于再植，為燒傷或外傷皮膚的病人植皮。
5.3.1 大鼠皮膚凍干工藝及藥物滲透性實驗
東北大學的鄭文利博士早在20世紀末就進行了大鼠皮膚凍干的實驗研究。取活大鼠脫頸處死后，立即用電動去毛刀去其腹部鼠毛，剝離皮膚，除去皮下脂肪層、血管及殘留物，用蒸餾水沖洗干凈，制成不同尺寸的皮片，再用生理鹽水沖洗數次備用。將制備好的大鼠皮放在速率降溫儀中，以-5℃/min、-l5℃/min、-30℃/min三種不同速率降溫至-30℃。將三種不同降溫速率預凍的大鼠皮，分別放入小型凍干機中抽真空，30min后壓力穩(wěn)定在120Pa,不主動加熱，連續(xù)干燥34h后關機，充氮氣后取出，用無菌塑料袋封裝后，放在干燥器內保存。
將以不同預凍速率凍干的大鼠皮膚，經10%福爾馬林固定，石蠟包埋制片，進行病理切片，切片厚度4～5μm,HE染色，再顯微鏡觀察。新鮮大鼠皮組織切片如圖5-8所示，以5℃/min速率預凍并凍干大鼠皮組織切片如圖5-9所示。從圖中可以看出凍干皮組織與新鮮皮組織相本相同，未見細胞破裂、上皮脫離、組織褶皺、細胞變性和細胞間隙增寬等異常，說明凍干皮組織結構未發(fā)生變化。其他速率預凍并凍干后的結果基本一致。
凍干大鼠皮角質細胞間隙脂流動性的電子自旋共振(ESR)測定：選 用5-噁唑氮氧自由基硬質酸(5-DSA)作為自旋轉標記物，將新鮮的和 三種不同預凍速率的凍干大鼠皮角質層樣品泡在濃度為1×10-4mol/L 的5-DSA緩沖液(pH=7.4)中12h，保溫20℃，然后取出淋洗干凈，37℃烘箱干燥1h，分別放進電子自旋共振波譜儀樣品管內，再置于腔中。ESR測定條件：掃描寬度200G，接收增益3.2×104，時間常數20.48ms，微波功率5.02mW，掃描時間83.888s，調制頻率 25.000kHz，調制幅度0.947G。經ESR波譜分析得知，三種不同凍 結速率預凍的凍干大鼠皮與新鮮大鼠皮各系數相比無顯著差異，說明 凍干大鼠皮膚未引起表皮細胞間脂質結構的變化，大鼠表皮角質細胞 間脂質排列的有序性沒有改變，流動性沒有增加。
實驗采用尼莫地平為模型藥物（一種腦血管擴張藥），選用預凍速 率為l5℃/min的凍干大鼠皮和新鮮大鼠皮做藥物滲透性實驗，考察其 組織結構有無變化。實驗采用裝置為V-lia-chien水平擴散池。它是由 兩個等容積的玻璃半池組成，半池內徑為l.35cm，有效擴散面積為 1.43cm2，容積為10mL。半池上方開口為取樣口，池底有凹陷平 臺，起到固定攪拌的作用。實驗時將皮膚固定在擴散池的兩個半池之 間，角質層面向供體池。水化1h后，供體池加入10mL尼莫地平的 30%丙二醇水過飽和溶液，接受池中加入10mL的30%丙二醇水，置 于32℃溫水浴中，磁力攪拌，定時取樣并更換全部接收介質。樣品經 徽孔濾膜(0.45nm)過濾，續(xù)濾液，樣品進人高效液相測定。尼莫地平 外含量測定采用高效液相色譜法紫外檢測。色譜條件：色譜柱 Spherisorb46mm×25cm，檢測波長237nm，流動相是甲醇/水 (64/36)，流速為1.1mL/min，進樣量10μL。實驗結果如表5-11所 示。
表5-11正常皮膚和凍干皮膚對尼莫地平滲透量比較
表5-11中的數據表明，在滲透9、10h、12h時，凍干皮膚與正常皮膚對藥物尼莫地的滲透量無顯若性差異。可見，凍干的大鼠皮膚能夠滿足藥理的實驗要求，可用做透皮制的實驗研究，可以長期貯存?zhèn)溆谩?/span>
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